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        關于我們首頁 > 產品中心 > 蛋白與免疫 > 蛋白提取/定量 > FS1026BCA蛋白濃度測定試劑盒(蛋白提取與定量)
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        • BCA蛋白濃度測定試劑盒(蛋白提取與定量)
        • 型號:FS1026
        • 報價:1500
        • 地區:上海市
        • 0
        • BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(蛋白提取與定量)(增強型)BCA(Bicinchoninic acid)法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法?;陔p縮脲反應,即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+,產生一種紫藍色復合物,在562nm處有高的吸光值,該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。
        • 021-34600120
        產品詳細介紹

        BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

        產品信息

        產品編號

        產品名稱

        規格

        價格(元)

        FS1026-500T

        BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

        500T

        280.00

        FS1026-2500T

        BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

        2500T

        800.00

        FS1026-5000T

        BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

        5000T

        1500.00

        BCA蛋白濃度測定試劑盒(蛋白提取與定量)BCA蛋白濃度測定試劑盒(蛋白提取與定量)

         產品描述

        BCABicinchoninic acid)法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法?;陔p縮脲反應,即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+,產生一種紫藍色復合物,在562nm處有高的吸光值,該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。

        BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測,也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量(100μl)的蛋白樣品,但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20v/v),從而降低干擾物質帶來的影響。后者操作簡單方便,僅需少量(10-25μl)的蛋白樣品。不過,由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8v/v),某種程度上限制干擾物質的承受濃度以及降低**檢測水平。我司提供三種規格的BCA蛋白濃度檢測試劑盒,比色皿法分別可做50次,250次,500次。酶標法分別可做500次,2500次,以及5000次。

        產品特點

        1. 靈敏度高,小檢測蛋白量可達0.2μg,檢測濃度下限達到10μg/ml。
        2. 速度快,比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統的Lowry法檢測速度約快4倍。
        3. 線性范圍廣,20-2000μg/ml濃度范圍內有較好的線性范圍。
        4. 不受大部分樣品中的化學物質的影響,可以兼容樣品中5%SDS,5%Triton X-100,5%Tween 20,60,80等。(詳情見附錄

        室溫運輸。試劑盒室溫保存即可,其中短期不用的蛋白標準品(BSA)也可放到4 ºC保存。有效期12個月。

        注意事項

        1. 使用BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關,因此需注意保持定時和定溫,以確保精確定量。
        2. 低溫或長期保存,若發現BCA試劑A或者試劑B有沉淀發生。請37ºC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌污染,則應丟棄,避免對實驗結果造成影響。
        3. 實驗操作規范,提高上樣量的精確度。
        4. 每次測定都需做相應的標準曲線,因為顯色反應與溫度和時間的變化有關,精準的蛋白定量宜每次都做標準曲線。

        操作方法

        一、配制標準品和工作液

        1. 配制BSA標準品體系

        注:標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%NaCl1×PBS進行稀釋。

        BSA標準品體系配制可參考表一。

        表一BSA標準品體系配制(微孔板檢測,線性范圍20-2000μg/ml*

        Vial

        稀釋液體積(μl)

        2mg/ml BSA體積(μl)

        BSA終濃度(μg/ml)

        A

        0

        100

        2000

        B

        25

        75

        1500

        C

        50

        50

        1000

        D

        125

        75

        750

        E

        150

        50

        500

        F

        350

        50

        250

        G

        375

        25

        125

        H

        395

        5

        25

        I

        400

        0

        0=Blank

        *如用比色皿檢測,每管需加100μl標準品,按3個重復計算,每個濃度至少需配制300μl。

        2. 配制BCA工作液

        1. 計算所需要的總BCA工作液體積。
        2. BCA工作液體積=(標準品+待測樣品)×重復數×每個樣品所需要的BCA工作液
        3. 2.0ml BCA工作液,微孔板檢測每個樣品加200μl BCA工作液。
        4. 配制BCA工作液:50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑BA:B=50:1 ,充分混勻。
        5. BCA試劑B加入BCA試劑A中后,迅速渾濁,通過混勻后立即變澄清。BCA工作液裝入密封容器內,室溫條件24h穩定。

        二、檢測方法

        1. 比色皿檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20

        1)    各取100μl標準品和待測樣品加入到反應管中。

        2)    每管加入2.0ml BCA工作液,混勻。37孵育30min。

        注意:也可室溫孵育2h,或者60℃孵育30min。BCA檢測蛋白濃度,延長孵育時間會加深顏色反應。升高溫度會加快顯色反應。但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限,以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低,可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。

        1. 冷卻到室溫。在分光光度計上進行檢測,設定波長為562nm。用裝滿水的比色皿對儀器校零。然后在10分鐘內對所有樣品讀數。
        2. 由于BCA反應達不到真正的反應終點,即使溫度降低至室溫生色反應液會繼續。但是,由于室溫下生色比率相當低,因此若是10min內能對所有的樣本進行562nm吸光度的測試,不會導致明顯錯誤。
        3. 根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度ug/ml;Y-終的OD562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

        2. 微孔板檢測方法(樣品:BCA工作液=1:8

        1)    各取25μl標準品和待測樣品加入到微孔板中。

        注:樣品與工作液比例為1:8,若樣品有限,可使用10μl標準品和待檢測樣品進行檢測(即1:20),這時試劑盒的檢測范圍為125-2000μg/ml。

        2)    每孔加入200μl BCA工作液,振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板,37孵育30min。

        1. 冷卻到室溫,在酶標儀上的540595nm波長范圍處檢測吸光度,其中562nm波長為**。
        2. a)由于酶標板的光徑比比色皿短,使得酶標板檢測需要更好的樣品:BCA工作比率來獲得相同的檢測靈敏度。若使用高于562nm的檢測波長,建議延長孵育時間到2h。b)延長孵育時間或者提高樣品:BCA工作比會增高每個孔的OD562nm凈值,并且降低檢測下限和工作線性范圍。
        3. 根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度ug/ml;Y-終的OD562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
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